Particules Lentivirales d'Activation (h) SAP 18: sc-404214-LAC

SAP18 (SAP 18) code un composant central de la machinerie de répression transcriptionnelle, en interaction avec la désacétylation des histones et le remodelage de la chromatine afin de moduler les programmes d’expression génique. SAP18 s’associe au complexe Sin3/HDAC et contribue au contrôle épigénétique de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et de la transcription en réponse au stress. Par ces interactions, SAP18 aide à coordonner des voies impliquées dans le traitement des ARN et dans des sorties transcriptionnelles liées à la stabilité du génome. La répression dépendante de SAP18 lorsqu’elle est dérégulée a été étudiée dans le contexte d’états de chromatine aberrants pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles associés à une régulation épigénétique altérée.

Les particules d'activation lentivirales SAP 18 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SAP18 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SAP 18 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SAP18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SAP 18. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SAP18 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.