SAMHD1 Double Nickase Plasmid (m): sc-424985-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SAMHD1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SAMHD1 Double-Nickase-Plasmid (m) und SAMHD1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Samhd1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SAMHD1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAMHD1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Maus-SAMHD1 (Samhd1) kodiert eine dNTP-Triphosphohydrolase, die intrazelluläre Desoxynukleotid-Pools reguliert und während DNA-Replikation und -Reparatur zur Genomstabilität beiträgt. Durch die Modulation der Nukleotidverfügbarkeit beeinflusst SAMHD1 den Zellzyklusverlauf, Replikationsstress-Antworten und die DNA-Schadenssignalgebung und kann die Permissivität von Zellen gegenüber Retroelementen und viraler reverser Transkription beeinflussen. Die SAMHD1-Aktivität ist über ihre Auswirkungen auf zytosolische Signalwege der Nukleinsäure-Erkennung und Interferon-stimulierte Genprogramme mit der Homöostase der angeborenen Immunität verknüpft. Eine Dysregulation des SAMHD1-abhängigen Nukleotidstoffwechsels und der Nukleinsäure-Überwachung wurde in experimentellen Modellen mit entzündlichen Phänotypen und der Tumorbiologie in Verbindung gebracht, wodurch Samhd1 ein nützlicher Lokus für mechanistische Studien zur Genomerhaltung und Immun-Signalgebung ist.
SAMHD1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Samhd1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Samhd1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Samhd1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Samhd1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.