Plasmide CRISPR d'Activation (h2) S-100PBP: sc-413030-ACT-2

La protéine humaine S100PBP (S-100P binding protein), codée par le gène S100PBP, agit comme partenaire de liaison intracellulaire de la protéine S100P, qui se lie au calcium, et serait impliquée dans la coordination entre la signalisation dépendante du Ca2+ et l’organisation du cytosquelette ainsi que la dynamique de l’adhérence cellulaire. Cette protéine a été associée à la régulation de processus liés aux microtubules et pourrait influencer le trafic vésiculaire et des événements liés au cycle cellulaire via des réseaux d’interactions protéine–protéine modulant la polarité et la motilité cellulaires. Des altérations des profils d’expression de S100PBP ont été rapportées dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui étaye son intérêt pour l’étude des mécanismes sous-jacents à la migration, à l’invasion et aux transitions épithélio-mésenchymateuses, sans préjuger d’issues cliniques. L’édition génétique ou la perturbation de S100PBP dans des modèles cellulaires humains permet une exploration fonctionnelle des voies centrées sur S100P, la cartographie des partenaires d’interaction et l’évaluation des effets transcriptionnels et phénotypiques en aval, pertinents pour la biologie du cancer et la recherche sur la signalisation cellulaire.

S-100PBP Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100PBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

S-100PBP Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100PBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100PBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de S-100PBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100PBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de S-100PBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie S-100PBP dans les cellules tumorales présentant une expression de S100PBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.