Plasmide CRISPR d'Activation (h) RXRα: sc-400342-ACT

Le récepteur X des rétinoïdes alpha (RXRA ; RXRα) est un récepteur nucléaire activé par un ligand qui sert de partenaire central de dimérisation pour de multiples facteurs de transcription, notamment les PPAR, les LXR, le FXR, le VDR et les RAR, afin de réguler des programmes géniques contrôlant le métabolisme des lipides et du glucose, la signalisation des acides biliaires, l’inflammation et la différenciation cellulaire. RXRα module la transcription dépendante de la chromatine via le recrutement de coactivateurs et de corépresseurs, intégrant des signaux rétinoïdes et métaboliques dans l’ensemble des tissus. Une activité RXRA dérégulée ou des réseaux de signalisation RXRα altérés ont été associés à des dysfonctionnements métaboliques, à des réponses immunitaires aberrantes et à des effets dépendants du contexte sur la prolifération et la différenciation en biologie des cancers. En tant que nœud transcriptionnel, RXRA est largement utilisé pour étudier les interactions (crosstalk) entre récepteurs nucléaires et les circuits transcriptionnels dans des modèles d’hépatocytes, d’adipocytes, de macrophages et de cellules cancéreuses.

RXRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RXRA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RXRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RXRA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RXRA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RXRα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RXRA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RXRα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RXRα dans les cellules tumorales présentant une expression de RXRA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.