Plasmide Double Nickase (h) RUNX3: sc-401377-NIC

RUNX3 (Runt-related transcription factor 3) est un facteur de transcription se liant à l’ADN de la famille RUNX, qui forme un hétérodimère avec CBFB afin de réguler la spécification des lignages, la différenciation et le contrôle du cycle cellulaire. Dans les tissus humains, il intègre des signaux issus de la voie TGF-β/SMAD et interagit avec les programmes transcriptionnels liés à Wnt/β-caténine et à l’immunité pour moduler l’homéostasie épithéliale et les réponses inflammatoires. Une expression ou une fonction altérée de RUNX3 a été associée à une dérégulation de l’apoptose et de la différenciation, et a été rapportée dans des études sur les cancers gastro-intestinaux, le cancer du sein et des troubles immunitaires. En tant que régulateur contextuel de réseaux transcriptionnels, RUNX3 est largement utilisé pour étudier les mécanismes de suppression tumorale, le dialogue épithélio-immunitaire et la régulation des gènes du développement.

RUNX3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RUNX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RUNX3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RUNX3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RUNX3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.