RUNX1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400803-ACT

RUNX1（AML1）は、コア結合因子（core-binding factor）複合体を構成する配列特異的転写因子であり、造血幹細胞および前駆細胞の規定、系譜コミットメント、ならびに骨髄系・リンパ系集団の成熟を統括します。RUNX1は、CBFβなどの補因子やクロマチンリモデリング因子と協調してエンハンサーやプロモーターに結合し、サイトカインや発生シグナル伝達ネットワークとも交差しながら、増殖・分化・アポトーシスを制御する遺伝子プログラムを調節します。RUNX1の発現量（用量）や機能の変化は、造血の転写制御を乱す反復性転座や点突然変異などを介して、血液悪性腫瘍や骨髄不全症候群と強く関連しています。血球の運命決定における中心的ノードとして、RUNX1は転写制御、エピジェネティックなリモデリング、白血病関連経路のモデリングの分野で広く研究されています。

RUNX1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RUNX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RUNX1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RUNX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRUNX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RUNX1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRUNX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRUNX1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRUNX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRUNX1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。