RoXaN Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411701-LAC

Lo ZC3H7B umano codifica la proteina a dita di zinco RoXaN, un fattore associato all’RNA implicato nella regolazione post-trascrizionale dell’espressione genica attraverso il legame con l’RNA e l’interazione con componenti di complessi ribonucleoproteici. RoXaN è stata collegata al controllo del metabolismo dell’mRNA, inclusi effetti sulla stabilità dei trascritti e sulla traduzione, che possono influenzare i programmi di stato cellulare. Attraverso queste funzioni di regolazione dell’RNA, ZC3H7B è rilevante per studi sulle interazioni ospite–virus e sui processi di risposta allo stress cellulare, in cui il rimodellamento del destino dell’RNA è un determinante chiave del fenotipo. Un’alterata regolazione delle reti di processamento dell’RNA che coinvolgono RoXaN è stata discussa nel contesto di programmi di espressione genica rilevanti per il cancro e di altre malattie caratterizzate da un’omeostasi dell’RNA compromessa.

Le particelle di attivazione lentivirale RoXaN (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ZC3H7B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RoXaN (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ZC3H7B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RoXaN. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ZC3H7B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.