ROS-GC1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404483

Descripción general

GUCY2D codifica ROS-GC1, una guanilato ciclasa receptora unida a membrana que sintetiza cGMP en respuesta a señales intracelulares de Ca2+ transmitidas por proteínas activadoras de la guanilato ciclasa. En los fotorreceptores de la retina, ROS-GC1 favorece la recuperación y la adaptación al restituir los niveles de cGMP que controlan la actividad de los canales regulados por nucleótidos cíclicos dentro de la cascada de fototransducción. Esta enzima integra la homeostasis del calcio con la señalización por segundos mensajeros para ajustar la excitabilidad de la membrana y la salida sináptica. La desregulación o las variantes patogénicas en GUCY2D se asocian con trastornos retinianos hereditarios, lo que la convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la señalización de cGMP y de la función de neuronas sensoriales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ROS-GC1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GUCY2D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GUCY2D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GUCY2D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ROS-GC1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GUCY2D para la investigación de la señalización de ROS-GC1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GUCY2D críticos para la función de ROS-GC1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GUCY2D para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GUCY2D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ROS-GC1 (h) y el plásmido HDR ROS-GC1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GUCY2D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GUCY2D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.