ROR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401841-ACT

O ROR1 humano (receptor tirosina-quinase tipo órfão 1) é um receptor transmembranar de passagem única da família ROR, implicado na sinalização Wnt não canônica, particularmente em vias conduzidas por WNT5A que regulam a dinâmica do citoesqueleto, a polaridade e a migração direcionada. O ROR1 atua como uma plataforma de sinalização dependente do contexto que modula nós a jusante, como as GTPases Rho e programas associados à MAPK, influenciando a sobrevivência e a motilidade celulares. Em tecidos adultos, o ROR1 geralmente apresenta baixa expressão, enquanto expressão elevada é relatada em múltiplas neoplasias e está associada a fenótipos invasivos e estados de diferenciação alterados. Essas propriedades tornam o ROR1 um alvo útil para estudar a reativação de sinalização do desenvolvimento, a plasticidade epitélio–mesenquimal e dependências de sinalização em células tumorais.

ROR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ROR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ROR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ROR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ROR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ROR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ROR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ROR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ROR1 em células tumorais com expressão de ROR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.