Plasmide Double Nickase (h) RORγ: sc-400912-NIC

RORC code pour le récepteur nucléaire RORγ, un facteur de transcription régulé par des ligands qui se fixe aux éléments de réponse ROR afin de contrôler des programmes géniques impliqués dans la différenciation immunitaire et le métabolisme. RORγ est un régulateur central de l’engagement de la lignée des cellules Th17 et de l’expression des cytokines de la famille IL‑17, intégrant des signaux issus des réseaux de cytokines et de la signalisation des récepteurs nucléaires pour façonner des états transcriptionnels inflammatoires. En plus de ses rôles dans l’immunité adaptative, RORγ contribue à l’organogenèse des organes lymphoïdes et à un contrôle transcriptionnel plus large dans les cellules hématopoïétiques. Une activité dérégulée de RORC/RORγ a été impliquée dans des voies associées à l’inflammation chronique et à l’auto-immunité, ainsi que dans la biologie du microenvironnement tumoral et immunitaire, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques sur la signalisation immunitaire.

RORγ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RORC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RORC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RORC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RORC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.