Plasmide CRISPR d'Activation (h) RORβ: sc-402834-ACT

RORB code pour le récepteur nucléaire RORβ, un facteur de transcription se liant à l’ADN qui régule des programmes géniques impliqués dans la différenciation neuronale, la sortie du rythme circadien et le développement des systèmes sensoriels. En tant que membre du réseau ROR/REV-ERB, RORβ s’articule avec le contrôle transcriptionnel des voies métaboliques et développementales, façonnant l’identité et l’excitabilité spécifiques des types cellulaires. L’expression de RORB est enrichie dans le système nerveux central, notamment dans des populations rétiniennes et corticales, où elle contribue à la formation des circuits neuronaux et à la régulation de gènes liés aux photorécepteurs. La dérégulation des programmes transcriptionnels associés à RORB a été reliée, dans des contextes de recherche, à des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques.

RORβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RORB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RORβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RORB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RORB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RORβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RORB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RORβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RORβ dans les cellules tumorales présentant une expression de RORB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.