RNF25 Plasmide Double Nickase (h): sc-408040-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF25 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF25 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF25 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF25. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RNF25 Antibody (E-10): sc-398749
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF25 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF25 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF25 codifica una ligasi E3 ubiquitina-proteina contenente un dominio RING finger che contribuisce a regolare la stabilità delle proteine e la segnalazione catalizzando il trasferimento di ubiquitina su specifici substrati. Attraverso il controllo ubiquitina-dipendente del turnover proteico e della composizione dei complessi di segnalazione, RNF25 può influenzare vie collegate alle risposte immunitarie innate e infiammatorie, inclusa la modulazione di programmi trascrizionali associati a NF-κB. Come componente del sistema ubiquitina–proteasoma cellulare, RNF25 contribuisce alla proteostasi e alla terminazione del segnale, processi spesso alterati nella biologia del cancro e nella disregolazione immunitaria. Un’alterata espressione o attività di ligasi dell’ubiquitina come RNF25 è quindi rilevante per studi sulla segnalazione da stress, sulla trascrizione guidata dalle citochine e sul cross-talk tra vie di segnalazione nelle cellule umane.
RNF25 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF25 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF25. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF25. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF25 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.