Plasmide CRISPR d'Activation (h) RNF126: sc-405024-ACT

RNF126 code une ligase E3 de l’ubiquitine qui contribue au maintien de l’homéostasie protéique en catalysant le transfert d’ubiquitine vers des substrats spécifiques, ce qui influence leur stabilité, leur localisation et leur dégradation. Grâce au contrôle, dépendant de l’ubiquitine, de régulateurs de la signalisation et du cycle cellulaire, RNF126 participe à des voies qui gouvernent la prolifération, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes transcriptionnels façonnant les décisions de destinée cellulaire. Des réseaux d’ubiquitination dérégulés impliquant RNF126 ont été associés à une altération du contrôle de la croissance et de l’adaptation au stress dans des contextes pertinents pour le cancer, ce qui en fait une cible utile pour étudier la signalisation pilotée par la protéostasie. La modulation expérimentale de RNF126 permet des études mécanistiques de l’activité des ligases d’ubiquitine, de la reconnaissance des substrats et des interactions entre voies dans des modèles de cellules humaines.

RNF126 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RNF126 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RNF126 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RNF126 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RNF126, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RNF126. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RNF126 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RNF126 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RNF126 dans les cellules tumorales présentant une expression de RNF126 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.