Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rnd1 (h): sc-406603

Présentation

RND1 code pour Rnd1, une petite GTPase atypique de la famille Rho, constitutivement liée au GTP, qui agit principalement comme régulateur de l’organisation du cytosquelette d’actine et de l’adhérence cellulaire. La signalisation de Rnd1 antagonise la contractilité dépendante de RhoA/ROCK, influençant la formation des fibres de stress, la dynamique des adhésions focales et l’arrondissement cellulaire, avec des effets en aval sur la migration et la croissance des neurites. Grâce à des interactions croisées avec la signalisation des intégrines et les voies de remodelage du cytosquelette, Rnd1 contribue à coordonner les changements de morphologie cellulaire au cours du développement et du maintien de l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de RND1 ou un déséquilibre de ses voies a été associé, en biologie du cancer, à des phénotypes de motilité et d’invasion dérégulés, ainsi qu’à des perturbations de processus neuronaux et vasculaires étudiés dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rnd1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RND1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RND1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RND1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rnd1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RND1 pour l'étude de la signalisation de Rnd1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RND1 essentiels à la fonction de Rnd1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RND1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rnd1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rnd1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RND1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rnd1 plasmide HDR (h) et le Rnd1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RND1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RND1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.