Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rlf (h): sc-410980

Présentation

RLF (RLF zinc finger) code pour Rlf, une protéine nucléaire liant l’ADN impliquée dans la régulation transcriptionnelle via son interaction avec la chromatine et des éléments régulateurs de l’ADN. Rlf contient des motifs « doigt de zinc » compatibles avec un rôle dans le contrôle de programmes d’expression génique influençant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le maintien de l’identité cellulaire. Une régulation altérée des réseaux transcriptionnels impliquant RLF a été associée à une perturbation du contrôle de la prolifération et à d’autres anomalies de l’expression génique pertinentes pour la biologie des maladies, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans des cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rlf (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RLF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RLF, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RLF à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rlf.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RLF pour l'étude de la signalisation de Rlf, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RLF essentiels à la fonction de Rlf
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RLF pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rlf plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rlf plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RLF. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rlf plasmide HDR (h) et le Rlf (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RLF pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RLF définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.