Plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS6 (h): sc-404102

Présentation

RGS6 (Regulator of G protein signaling 6) code une protéine activatrice de la GTPase qui accélère l’arrêt de la signalisation des GPCR en favorisant l’hydrolyse du GTP par la sous-unité Gα, modulant ainsi l’amplitude et la durée des voies cAMP/PKA et d’autres voies dépendantes des protéines G hétérotrimériques. Au-delà de la régulation canonique des GPCR, RGS6 a été impliquée dans le contrôle des réponses au stress cellulaire, de la fonction mitochondriale et de la signalisation apoptotique, avec des rôles rapportés en physiologie neuronale et cardiaque. Une activité ou une expression dérégulée de RGS6 a été associée à une neurotransmission altérée et à un déséquilibre de l’homéostasie des signaux dans des tissus où les circuits GPCR dominent, ce qui justifie son étude dans des modèles de neurobiologie et de signalisation cardiovasculaire. Ces fonctions font de RGS6 une cible utile pour étudier la reprogrammation des voies en aval des GPCR et des effecteurs couplés aux protéines G.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RGS6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RGS6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RGS6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RGS6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RGS6 pour l'étude de la signalisation de RGS6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RGS6 essentiels à la fonction de RGS6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RGS6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RGS6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RGS6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RGS6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RGS6 plasmide HDR (h) et le RGS6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RGS6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RGS6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.