RESP18 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422652

Descripción general

Resp18 codifica RESP18, una proteína asociada a los gránulos secretores neuroendocrinos, enriquecida en las células de los islotes pancreáticos y en otros tejidos secretores regulados. RESP18 participa en la biogénesis de los gránulos secretores y en la clasificación de su carga, favoreciendo la liberación hormonal dependiente del estímulo y el mantenimiento del contenido de los gránulos. Por su relación con la exocitosis regulada y la homeostasis de las células endocrinas, Resp18 ofrece un punto de entrada molecular para estudiar las vías que controlan la maduración de los gránulos de insulina y la dinámica de su secreción. Los fenotipos de alteración en la organización de los gránulos o en la secreción hormonal en modelos experimentales hacen que Resp18 sea relevante para la investigación de disfunciones metabólicas y endocrinas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RESP18 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Resp18 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Resp18 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Resp18 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RESP18.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Resp18 para la investigación de la señalización de RESP18, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Resp18 críticos para la función de RESP18
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Resp18 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RESP18 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RESP18 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Resp18. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RESP18 (m) y el plásmido HDR RESP18 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Resp18 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Resp18 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.