Plasmide CRISPR/Cas9 KO REP-2 (h): sc-417782

Présentation

CHML code pour la protéine d’escorte des Rab 2 (REP-2), une chaperonne cytosolique qui se lie aux GTPases Rab nouvellement synthétisées et les présente à la géranylgéranyltransférase des Rab pour leur prénylation, une modification lipidique nécessaire à leur association aux membranes. Par cette étape de maturation des Rab, REP-2 soutient des voies de trafic vésiculaire incluant le transport endosomal et golgien, l’exocytose et les dynamiques membranaires liées à l’autophagie. Une perturbation de la prénylation des Rab ou du cycle des Rab peut altérer l’identité des organites et le tri intracellulaire des cargos, des processus fréquemment impliqués dans la neurodégénérescence, les affections rétiniennes et, plus largement, des phénotypes de stress cellulaire liés au trafic. CHML est également étudié dans des contextes où la signalisation dépendante des Rab et le remodelage membranaire s’entrecroisent avec la fonction des cellules immunitaires et la biologie des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO REP-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHML dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHML, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHML à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine REP-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHML pour l'étude de la signalisation de REP-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CHML essentiels à la fonction de REP-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHML pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le REP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le REP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHML. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le REP-2 plasmide HDR (h) et le REP-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHML pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHML définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.