Rent1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402462-ACT

ヒトUPF1（Rent1）はATP依存性RNAヘリカーゼであり、ナンセンス変異依存mRNA分解（NMD）の中心的エフェクターである。NMDは、早期終止コドンを含む転写産物を検出して分解する保存的な経路である。UPF1はSMGタンパク質やエクソン結合複合体（EJC）との相互作用を介して、翻訳終結の監視をmRNPのリモデリング、RNA品質管理、ならびに正常転写産物アイソフォームの制御へと結び付ける。さらにNMDにとどまらず、UPF1はテロメア維持、ゲノム安定性、ストレス応答性のRNA代謝にも寄与し、RNA監視をより広範な細胞恒常性と連関させている。UPF1活性の破綻は、腫瘍形成や神経発達表現型などの文脈において、トランスクリプトームの完全性の変化や異常なプロテオーム出力と関連付けられており、RNA制御の機構研究に有用な標的であることを支持する。

Rent1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UPF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rent1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UPF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUPF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rent1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUPF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRent1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUPF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRent1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。