RBM7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408808-ACT

ヒトRBM7はRNA結合タンパク質をコードしており、核内エキソソーム標的化（NEXT）複合体の中核構成因子として機能します。RBM7はZCCHC8およびSKIV2L2/MTR4と協調して、特定の核内RNAをRNAエキソソームへ誘導し、プロセシングおよび分解へと導きます。RBM7はUリッチな配列要素を優先的に認識し、プロモーター上流転写産物、エンハンサーRNA、その他の短寿命ノンコーディングRNAの分解回転を促進することでRNA監視に寄与し、転写出力を整えるとともに核内RNA恒常性を維持します。転写およびクロマチン関連RNA代謝とRNA品質管理の連関を通じて、RBM7はゲノム安定性やストレス応答性の遺伝子発現プログラムにも影響を及ぼします。RBM7が関与する核内RNA分解経路の破綻は、遺伝子制御ネットワークの変化と関連づけられており、がんに伴う転写リモデリングや、RNAプロセシング異常に起因する神経発達表現型の研究においても重要性が示唆されています。

RBM7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RBM7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RBM7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RBM7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRBM7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RBM7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRBM7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRBM7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRBM7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRBM7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。