Plasmide Double Nickase (h) Rb: sc-400116-NIC

RB1 code la protéine du rétinoblastome (Rb), un suppresseur de tumeur central qui freine la progression du cycle cellulaire de G1 à S en se liant aux facteurs de transcription E2F et en les réprimant, tout en coordonnant les programmes transcriptionnels requis pour la réplication de l'ADN. L'activité de Rb est régulée de manière dynamique par la phosphorylation médiée par cycline D–CDK4/6 et cycline E–CDK2, intégrant les signaux mitogènes aux points de contrôle, à la régulation de la chromatine et à la différenciation cellulaire. Via ses liens avec les réponses aux dommages de l'ADN, la sénescence et l'apoptose, RB1 contribue au maintien de la stabilité génomique et au contrôle de la capacité proliférative. L'altération de la fonction de RB1 est récurrente dans de nombreux cancers et constitue la lésion caractéristique du rétinoblastome, faisant de RB1 un nœud clé des voies qui gouvernent l'oncogenèse et les décisions de destinée cellulaire.

Rb Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.