Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag B (m): sc-434164

Présentation

Rragb code Rag B, une petite GTPase de type Ras apparentée qui forme des hétérodimères avec RagA/RagC/RagD afin de relier la disponibilité intracellulaire en acides aminés à l’activation de mTORC1 à la surface du lysosome. En régulant le recrutement de mTORC1 vers le complexe Ragulator et en s’intégrant aux signaux de détection des nutriments, Rag B influence la synthèse protéique, l’autophagie, la fonction lysosomale et l’adaptation métabolique. Une perturbation de la signalisation des GTPases Rag peut remodeler l’équilibre anabolisme–catabolisme et les réponses au stress, des processus fréquemment impliqués dans les programmes de croissance oncogénique ainsi que dans des phénotypes neurodégénératifs et immunométaboliques. Dans les modèles murins, Rragb constitue donc un point d’entrée utile pour disséquer les réseaux de signalisation induits par les nutriments et leurs retombées transcriptionnelles et translationnelles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rragb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rragb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rragb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rag B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rragb pour l'étude de la signalisation de Rag B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rragb essentiels à la fonction de Rag B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rragb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rag B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Rag B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rragb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rag B plasmide HDR (m) et le Rag B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rragb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rragb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.