RADX Lentiviral Activation Particles (h): sc-409991-LAC

Das humane CXorf57 kodiert RADX, einen einzelsträngige DNA-bindenden Faktor, der die Dynamik von Replikationsgabeln und die Genomstabilität reguliert. RADX moduliert die Beladung von RAD51 an gestallten Gabeln und hilft, unter Replikationsstress das Gleichgewicht zwischen Gabelfortschutz, Neustart und Repriming während der Replikation zu wahren; zudem ist es in die ATR-abhängige DNA-Schadenssignalgebung und die Kontrolle der homologen Rekombination eingebunden. Über diese Funktionen trägt RADX zur Unterdrückung aberranter Rekombination und zur Aufrechterhaltung der Chromosomenintegrität bei und ist damit relevant für Studien zu Replikationsstress-Phänotypen, Mutationsprozessen und Genominstabilität, wie sie in unterschiedlichen Krankheitskontexten beobachtet werden.

RADX Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CXorf57-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

RADX Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CXorf57-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen RADX-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CXorf57-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.