Plasmide Double Nickase (h) Rad51D: sc-408085-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rad51D correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rad51D Double Nickase (h) et le plasmide Rad51D Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAD51D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rad51D Antibody (C-1): sc-398819
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rad51D | sc-408085-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rad51D | sc-408085-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAD51D code pour Rad51D, un paralogue de RAD51 qui agit au sein du complexe BCDX2 afin de favoriser la recombinaison homologue (RH) et la reprise des fourches de réplication bloquées. Rad51D participe à la réparation des cassures double brin de l’ADN, contribue à la stabilité du génome et interagit avec le réseau Fanconi anemia/BRCA ainsi qu’avec la signalisation des points de contrôle durant les phases S et G2. Des défauts de RAD51D compromettent la capacité de RH, augmentent l’instabilité chromosomique et sont associés à une prédisposition héréditaire aux cancers et à la tumorigenèse dans plusieurs types de tissus. Par conséquent, RAD51D est largement étudié dans les voies de réponse aux dommages de l’ADN, les modèles de stress réplicatif et les analyses structure–fonction des complexes médiateurs de la RH.
Rad51D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAD51D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAD51D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAD51D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAD51D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.