Plasmide Double Nickase (h) Rad51: sc-400100-NIC

Le gène humain **RAD51** code **Rad51**, une recombinase centrale qui catalyse la recherche d'homologie et l'échange de brins d'ADN au cours de la recombinaison homologue, permettant une réparation à haute fidélité des cassures double brin de l'ADN et des fourches de réplication bloquées. Rad51 agit en aval de **BRCA1/BRCA2** et coopère avec **RAD52**, **PALB2** et des facteurs associés à la réplication pour préserver la stabilité du génome pendant les phases **S** et **G2**. Par ses rôles dans les réponses au stress réplicatif, la recombinaison méiotique et la réparation de l'ADN dépendante de la chromatine, l'activité de RAD51 influence la signalisation des points de contrôle et l'échange entre chromatides sœurs. Un dérèglement de l'expression ou de la fonction de RAD51 est associé à des phénotypes d'instabilité génomique et fait fréquemment l'objet d'études dans le contexte de la biologie tumorale, des déficits héréditaires de réparation de l'ADN et de la sensibilité aux agents endommageant l'ADN dans des systèmes expérimentaux.

Rad51 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAD51 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAD51. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAD51. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAD51.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.