Plásmido Doble Nickase (h) Rad51: sc-400100-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rad51 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rad51 (h) y el plásmido de doble nickasa Rad51 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RAD51. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rad51 Anticuerpo (F-11): sc-398587
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rad51 | sc-400100-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Rad51 | sc-400100-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **RAD51** codifica Rad51, una recombinasa central que cataliza la búsqueda de homología y el intercambio de cadenas de ADN durante la recombinación homóloga, permitiendo la reparación de alta fidelidad de roturas de doble cadena del ADN y de horquillas de replicación detenidas. Rad51 actúa aguas abajo de **BRCA1/BRCA2** y se coordina con **RAD52**, **PALB2** y factores asociados a la replicación para preservar la estabilidad del genoma durante las fases **S** y **G2**. A través de sus funciones en las respuestas al estrés replicativo, la recombinación meiótica y la reparación del ADN basada en la cromatina, la actividad de RAD51 influye en la señalización de puntos de control (checkpoints) y en el intercambio de cromátidas hermanas. La desregulación de la expresión o la función de RAD51 se asocia con fenotipos de inestabilidad genómica y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología tumoral, los defectos hereditarios de reparación del ADN y la sensibilidad a agentes que dañan el ADN en sistemas experimentales.
Rad51 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAD51 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAD51. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAD51. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAD51 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.