Plasmide CRISPR d'Activation (m) Rad21: sc-422577-ACT

La RAD21 de la souris est un composant central du complexe cohésine, qui stabilise la cohésion des chromatides sœurs et coordonne la ségrégation des chromosomes lors de la mitose et de la méiose. Au-delà de son rôle structurel, RAD21 contribue à la réparation des dommages à l’ADN, à la stabilité des fourches de réplication et à l’organisation tridimensionnelle du génome en modulant la dynamique des boucles de chromatine et les interactions à longue distance entre enhancers et promoteurs. Par ces fonctions, Rad21 participe à la régulation de programmes transcriptionnels qui contrôlent la prolifération et la différenciation, reliant l’activité de la cohésine à la mise en place des patrons de développement et à l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation de la fonction de la cohésine, notamment des niveaux altérés de RAD21, a été associée à une instabilité génomique et à des signatures d’expression génique aberrantes pertinentes pour la biologie du cancer et les syndromes du développement liés à la cohésine.

Rad21 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Rad21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rad21 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Rad21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Rad21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rad21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Rad21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rad21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rad21 dans les cellules tumorales présentant une expression de Rad21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.