Plasmide Double Nickase (h) Rad18: sc-406099-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rad18 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rad18 Double Nickase (h) et le plasmide Rad18 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAD18. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rad18 Antibody (79B1048): sc-52949
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rad18 | sc-406099-NIC | 20 µg | $410.00 |
RAD18 humain code Rad18, une ligase E3 d’ubiquitine qui coordonne la tolérance aux dommages de l’ADN post-réplication en s’associant à l’enzyme E2 RAD6 pour monoubiquitinyler PCNA et favoriser la synthèse translésionnelle ainsi que le changement de matrice. Par cette voie centrée sur PCNA, Rad18 aide à redémarrer les fourches de réplication bloquées et limite l’instabilité génomique associée à la réplication après l’exposition aux UV et à d’autres stress génotoxiques. RAD18 s’insère dans des réseaux plus larges de réparation de l’ADN et de réponse au stress réplicatif, influençant les taux de mutagenèse, la stabilité chromosomique et la sensibilité cellulaire aux agents endommageant l’ADN. Une dérégulation de RAD18 a été associée à une capacité modifiée de tolérance aux dommages de l’ADN et à des phénotypes d’instabilité génomique fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans des modèles de troubles héréditaires de réparation de l’ADN.
Rad18 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAD18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAD18. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAD18. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAD18.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.