Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rac 2: sc-401157-ACT

RAC2 code pour Rac2, une petite GTPase de la famille Rho enrichie dans les cellules hématopoïétiques, qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, la polarité cellulaire et le trafic membranaire. Rac2 agit en aval des voies de signalisation des immunorécepteurs, des intégrines et des chimiokines pour réguler l’activation de la NADPH oxydase, la production d’espèces réactives de l’oxygène et les réponses antimicrobiennes des phagocytes, tout en influençant les sorties de signalisation dépendantes des voies MAPK et PI3K. Dans les leucocytes, Rac2 soutient la chimiotaxie, l’adhésion, la dégranulation et la dynamique de la synapse immunologique, reliant le contrôle du cytosquelette aux voies inflammatoires et de l’immunité innée. Une activité ou une expression dérégulée de RAC2 a été associée à des altérations de la défense de l’hôte et de l’homéostasie immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes d’immunodéficience, des phénotypes inflammatoires et de la signalisation des cellules hématologiques.

Rac 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RAC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rac 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RAC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RAC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rac 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RAC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rac 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rac 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de RAC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.