rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404628

Übersicht

RPH3A kodiert Rabphilin-3A, einen in Neuronen angereicherten Rab3A/Rab27-Effektor, der Ca²⁺-abhängige Signalwege mit der regulierten Exozytose von Vesikeln koppelt. Über Interaktionen mit kleinen GTPasen und Komponenten synaptischer Vesikel trägt Rabphilin-3A zum Andocken und „Priming“ von Vesikeln sowie zur Freisetzungswahrscheinlichkeit bei und unterstützt so eine effiziente Neurotransmittersekretion. Seine Aktivität überschneidet sich mit präsynaptischen Membrantransportwegen und der Zytoskelettdynamik, die Vesikelrecycling und synaptische Plastizität koordinieren. Eine Fehlregulation des synaptischen Vesikeltransports und der Freisetzungsmaschinerie unter Beteiligung von RPH3A ist für mechanistische Studien zur Biologie neurologischer und neuropsychiatrischer Erkrankungen relevant.

Das rabphilin-3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RPH3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RPH3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RPH3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die rabphilin-3A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RPH3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der rabphilin-3A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RPH3A-Exone abzielen, die für die rabphilin-3A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RPH3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom rabphilin-3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom rabphilin-3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RPH3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das rabphilin-3A HDR-Plasmid (h) und rabphilin-3A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RPH3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RPH3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.