Plasmide Double Nickase (h) Rab 5A: sc-417949-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rab 5A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rab 5A Double Nickase (h) et le plasmide Rab 5A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAB5A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rab 5A Antibody (C-3): sc-515401
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rab 5A | sc-417949-NIC | 20 µg | $410.00 |
RAB5A code Rab 5A, une petite GTPase qui joue le rôle de régulateur principal de l’endocytose précoce et du trafic membranaire endosomal. À l’état lié au GTP, Rab 5A coordonne l’internalisation dépendante de la clathrine, la fusion des endosomes précoces et le tri des cargos en recrutant des effecteurs qui contrôlent l’arrimage des vésicules et la signalisation des phosphoinositides. Par ces fonctions, elle influence le renouvellement des récepteurs et la dynamique de la transduction du signal dans diverses voies, notamment le trafic des récepteurs aux facteurs de croissance et la maturation des endosomes. Une activité ou une expression dérégulée de RAB5A a été associée à des programmes de transport intracellulaire altérés observés lors de l’invasion des cellules cancéreuses, dans des phénotypes neurodégénératifs et dans les mécanismes d’entrée de certains agents pathogènes, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du trafic membranaire et de la signalisation.
Rab 5A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAB5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAB5A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAB5A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAB5A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.