Rab 3B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403407-ACT

RAB3B codifica a Rab 3B, uma pequena GTPase enriquecida em neurônios e tecidos endócrinos que regula o tráfego vesicular dependente de Ca2+ e a exocitose acoplada a estímulos. Como um interruptor molecular que alterna entre estados ligados a GDP e a GTP, a Rab 3B coordena o acoplamento e a preparação das vesículas por meio de interações com efetores de Rab, contribuindo para a dinâmica das vesículas sinápticas e para vias de secreção regulada. Alterações no RAB3B associadas a mudanças em redes de transporte vesicular são relevantes para estudos de sinalização neuroendócrina e de fenótipos celulares dependentes de secreção, e a desregulação dos circuitos de GTPases Rab tem sido investigada em contextos neurológicos e associados ao câncer. Portanto, este gene é comumente usado para sondar pontos de controle do tráfego de membranas que moldam a secreção, a neurotransmissão e a fidelidade do transporte intracelular.

Rab 3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 3B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 3B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 3B em células tumorais com expressão de RAB3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.