Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rab 2A: sc-403154-ACT

Le gène humain **RAB2A** code la petite GTPase Rab2A, un régulateur central du trafic vésiculaire du réticulum endoplasmique (RE) vers l’appareil de Golgi et au sein même du Golgi, qui coordonne le tri des cargos, l’arrimage des vésicules et les événements de fusion via un cycle entre les états liés au GDP et au GTP. Rab2A contribue à l’homéostasie de la voie sécrétoire et participe à l’organisation des organites, notamment à l’intégrité du Golgi et à la dynamique membranaire qui influencent la maturation et l’acheminement des protéines. Par son rôle dans le trafic membranaire, **RAB2A** recoupe des voies qui contrôlent la protéostasie, le renouvellement des récepteurs et des réponses au stress associées à la croissance et à la survie cellulaires. Une signalisation des GTPases Rab et des programmes de trafic dérégulés, y compris des réseaux associés à **RAB2A**, sont fréquemment étudiés dans les contextes de la signalisation oncogénique, de la neurobiologie et des interactions pathogène–hôte, où la capacité de transport vésiculaire peut façonner des phénotypes pertinents pour la maladie.

Rab 2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RAB2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rab 2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RAB2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RAB2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rab 2A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RAB2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rab 2A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rab 2A dans les cellules tumorales présentant une expression de RAB2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.