Plasmide Double Nickase (h) Rab 27b: sc-403498-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rab 27b correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rab 27b Double Nickase (h) et le plasmide Rab 27b Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAB27B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rab 27b Antibody (1596CT245.254.49): sc-517602
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rab 27b | sc-403498-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rab 27b | sc-403498-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB27B code la petite GTPase Rab27b, un régulateur clé du trafic vésiculaire qui coordonne l’amarrage et la fusion des granules de sécrétion et des exosomes à la membrane plasmique. Rab27b fonctionne en alternant entre des états liés au GDP et au GTP, et mobilise des réseaux d’effecteurs impliqués dans le remodelage du cytosquelette, la dynamique membranaire et l’exocytose régulée. Dans les cellules humaines, le trafic dépendant de RAB27B influence des programmes de sécrétion pertinents pour la signalisation immunitaire et inflammatoire, la libération des granules des plaquettes et des neutrophiles, ainsi que la communication tumeur–stroma via des vésicules extracellulaires. Une expression ou une activité dérégulée de RAB27B a été associée à des phénotypes de sécrétion vésiculaire altérés observés lors de la progression tumorale et du comportement métastatique, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique en recherche sur le transport membranaire.
Rab 27b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAB27B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAB27B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAB27B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAB27B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.