Rab 24 Plasmide Double Nickase (h): sc-407266-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab 24 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab 24 Double Nickase Plasmid (h) e il Rab 24 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAB24. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab 24 Antibody (43): sc-136049
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab 24 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407266-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 24 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407266-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB24 codifica Rab 24, una piccola GTPasi della famiglia Rab che regola eventi di traffico di membrana legati alla dinamica degli endosomi tardivi, a vie correlate ai lisosomi e all’autofagia. Rab 24 è stata implicata nella maturazione degli autofagosomi e in processi di trasporto vescicolare che coordinano l’omeostasi cellulare in condizioni di stress. Un’alterazione dell’attività di RAB24 è stata associata a difetti della proteostasi e del turnover degli organelli, collegando la sua funzione a fenotipi cellulari rilevanti per la neurodegenerazione e le miopatie. In quanto regolatore del traffico, Rab 24 rappresenta un nodo accessibile per analizzare il cross-talk tra smistamento endosomiale, funzione lisosomiale e flusso autofagico.
Rab 24 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAB24 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAB24. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAB24. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAB24 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.