Rab 1A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422550

Descripción general

Rab1a codifica Rab 1A, una pequeña GTPasa que regula el tráfico secretor temprano coordinando el transporte vesicular del retículo endoplásmico (RE) al Golgi y dentro del propio Golgi, incluidos los eventos de gemación, anclaje y fusión de vesículas. Mediante su ciclo entre estados unidos a GTP y a GDP, Rab 1A interactúa con complejos efectores que influyen en la organización del Golgi, el procesamiento de proteínas y la entrega de la carga, contribuyendo así a la proteostasis y a la homeostasis de los orgánulos. El tráfico dependiente de Rab1a se conecta con las vías de autofagia y lisosomas al controlar el suministro de membrana y la maduración de compartimentos. La desregulación del transporte asociado a Rab1a se ha vinculado en la literatura con respuestas de estrés celular y fenotipos relevantes para contextos de neurodegeneración y señalización oncogénica, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar mecanismos de enfermedad impulsados por el tráfico de membranas en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rab 1A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rab1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rab1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rab1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rab 1A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rab1a para la investigación de la señalización de Rab 1A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rab1a críticos para la función de Rab 1A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rab1a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rab 1A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Rab 1A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rab1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rab 1A (m) y el plásmido HDR Rab 1A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rab1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rab1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.