Plasmide Double Nickase (h) Pyrin: sc-403193-NIC

MEFV code la pyrine, un capteur de l’immunité innée enrichi dans les cellules myéloïdes, qui régule la signalisation de l’inflammasome et l’activation des caspases inflammatoires en réponse à des signaux liés au cytosquelette et à la modulation des GTPases Rho. La pyrine contribue à coordonner l’assemblage des complexes d’inflammasome dépendant d’ASC, influençant la maturation des cytokines de la famille de l’IL‑1 et les voies pyroptotiques qui façonnent l’inflammation pilotée par les neutrophiles. Une activité MEFV dérégulée ou certaines variantes sont associées à des phénotypes auto‑inflammatoires et à une modification des seuils de réponse de l’immunité innée, ce qui en fait un locus utile pour disséquer les réseaux de signalisation inflammatoire. Dans les systèmes cellulaires humains, la perturbation de MEFV est couramment utilisée pour étudier la régulation de l’inflammasome, le traitement des cytokines et le dialogue entre la dynamique du cytosquelette et la détection innée.

Pyrin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MEFV dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MEFV. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MEFV. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MEFV.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.