Plasmide Double Nickase (h) Pygopus 2: sc-402894-NIC

PYGO2 code pour Pygopus 2, un coactivateur nucléaire qui constitue un composant central des complexes transcriptionnels canoniques Wnt/β-caténine. Grâce à ses interactions avec la β-caténine, BCL9/9L et des facteurs associés à la chromatine, Pygopus 2 contribue à relier la signalisation Wnt à la régulation de la chromatine et à des programmes de contrôle transcriptionnel qui gouvernent la prolifération, la différenciation et des états de type « cellule souche ». L’activité de PYGO2 a été associée à une modulation épigénétique des loci cibles de Wnt ainsi qu’à des réseaux transcriptionnels plus larges impliqués dans la progression du cycle cellulaire et la spécification des lignages. Une expression dérégulée de PYGO2 ou une hyperactivation de la voie Wnt est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie tumorale et des troubles du développement, ce qui fait de PYGO2 un nœud utile pour la dissection des voies de signalisation.

Pygopus 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PYGO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PYGO2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PYGO2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PYGO2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.