Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pumilio 1 (h): sc-406309

Présentation

PUM1 code pour Pumilio 1, une protéine de liaison à l’ARN conservée qui reconnaît des éléments de réponse Pumilio dans les régions 3′ UTR afin de réguler la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. En assemblant des complexes de régulation post-transcriptionnelle, PUM1 façonne des programmes d’expression génique contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le remodelage du transcriptome en réponse au stress. Pumilio 1 participe à des voies du métabolisme de l’ARN, notamment la répression traductionnelle, la dégradation des ARNm et la coordination avec la régulation médiée par les microARN. Une activité de PUM1 dérégulée a été associée à des altérations de la protéostasie et des programmes de maintenance du génome, et a été étudiée dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que de réseaux de régulation de l’ARN associés au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pumilio 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PUM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PUM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PUM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pumilio 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PUM1 pour l'étude de la signalisation de Pumilio 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PUM1 essentiels à la fonction de Pumilio 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PUM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pumilio 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pumilio 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PUM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pumilio 1 plasmide HDR (h) et le Pumilio 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PUM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PUM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.