Plasmide Double Nickase (m) PUMA: sc-431320-NIC

Le gène murin Bbc3 code PUMA (« p53 upregulated modulator of apoptosis »), un membre de la famille BCL-2 ne contenant que le domaine BH3, qui favorise la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale en neutralisant les protéines anti-apoptotiques de type BCL-2 et en permettant l’activation de BAX/BAK. PUMA est rapidement induite en réponse au stress cellulaire et intègre des signaux issus des réponses aux dommages de l’ADN dépendantes de p53, du retrait de facteurs de croissance et d’autres signaux pro-apoptotiques, afin d’engager l’apoptose intrinsèque et l’activation des caspases. Par ces voies, Bbc3/PUMA contribue à la régulation de l’homéostasie tissulaire et à l’élimination des cellules endommagées, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans des contextes de suppression tumorale, de neurodégénérescence et de survie des cellules immunitaires. En tant que nœud central des réseaux d’apoptose et de réponse au stress, PUMA est couramment utilisée pour disséquer les mécanismes des décisions de destin cellulaire et du contrôle des points de contrôle dans des modèles murins.

PUMA Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Bbc3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Bbc3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Bbc3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Bbc3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.