Plasmide Double Nickase (h) PUMAα/β: sc-400464-NIC

BBC3 code pour PUMAα/β (« p53 upregulated modulator of apoptosis »), une protéine de la famille BCL‑2 ne portant que le domaine BH3, qui constitue un puissant déclencheur de l'apoptose intrinsèque mitochondriale. PUMA favorise la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale en neutralisant les protéines BCL‑2 anti‑apoptotiques et en activant BAX/BAK, ce qui entraîne la libération du cytochrome c et l'activation des caspases. Son expression est induite au niveau transcriptionnel par p53 en réponse aux dommages de l'ADN et à d'autres stress cellulaires, reliant ainsi les signaux génotoxiques à l'engagement apoptotique, et elle s'inscrit aussi dans des programmes plus larges de réponse au stress qui influencent les décisions de destinée cellulaire. Une dérégulation de la signalisation BBC3/PUMA est impliquée dans la biologie des cancers, la neurodégénérescence et les lésions tissulaires, où des seuils d'apoptose modifiés contribuent à des phénotypes associés aux maladies.

PUMAα/β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BBC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BBC3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BBC3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BBC3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.