Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSS1: sc-404364-ACT

Le gène humain **PTDSS1** code la **phosphatidylsérine synthase 1 (PSS1)**, une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la production de phosphatidylsérine via des réactions d’échange de base utilisant la phosphatidylcholine comme substrat. La phosphatidylsérine est un phospholipide anionique central qui soutient la biogenèse membranaire, le trafic vésiculaire et la signalisation dépendante des lipides, et elle alimente la formation de phosphatidyléthanolamine par décarboxylation mitochondriale. En modulant la composition et la charge des membranes, l’activité de PSS1 influence les sites de contact entre organites, les réponses au stress et des voies liées à l’externalisation de la phosphatidylsérine associée à l’apoptose. Une dérégulation du métabolisme de la phosphatidylsérine a été associée à des altérations de la fonction neuronale, à des phénotypes squelettiques et à des troubles liés aux membranes, faisant de **PTDSS1** un nœud pertinent pour des études mécanistiques de l’homéostasie lipidique.

PSS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTDSS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTDSS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTDSS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTDSS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTDSS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.