Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSMD11: sc-410966-ACT

PSMD11 code une sous-unité régulatrice non ATPasique du capuchon (« lid ») du protéasome 26S, qui soutient la dégradation des protéines dépendante de l’ubiquitine et le maintien de la protéostasie. En favorisant un assemblage efficace du protéasome et le traitement des substrats, PSMD11 influence le renouvellement de régulateurs du cycle cellulaire, de facteurs de transcription et de protéines mal repliées, ce qui la relie à des voies telles que le contrôle du cycle cellulaire, les réponses au stress et le traitement des antigènes. Une activité altérée des sous-unités régulatrices du protéasome a été associée à une perturbation de l’homéostasie protéique et des programmes d’adaptation cellulaire observés dans des contextes liés au cancer et à la neurodégénérescence. PSMD11 est donc fréquemment étudiée comme modulateur de la capacité du protéasome et de la résistance au stress protéotoxique dans les cellules humaines.

PSMD11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMD11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSMD11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMD11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMD11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSMD11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMD11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSMD11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSMD11 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMD11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.