Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSMD1: sc-405171-ACT

PSMD1 code une sous-unité non ATPasique de la particule régulatrice 19S du protéasome 26S, une machinerie centrale assurant la dégradation, dépendante de l’ATP, des protéines polyubiquitinylées. En contribuant à la reconnaissance des substrats et à l’assemblage du protéasome, PSMD1 participe au contrôle qualité des protéines, à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la signalisation adaptative au stress via les voies du système ubiquitine–protéasome. Les sous-unités régulatrices du protéasome influencent le renouvellement de médiateurs clés de voies de signalisation, notamment des composants de la signalisation NF-κB et d’autres programmes transcriptionnels, reliant l’activité de PSMD1 à des états inflammatoires et prolifératifs. Une fonction du protéasome dérégulée et une expression altérée de ses sous-unités sont fréquemment associées à des phénotypes oncogéniques, au stress protéotoxique et à des défauts d’homéostasie protéique pertinents pour la neurodégénérescence.

PSMD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSMD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSMD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSMD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSMD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.