Plasmide CRISPR d'Activation (h) Psf2: sc-405023-ACT

Le gène humain **GINS2** code **Psf2**, une sous-unité essentielle du complexe **GINS**, qui coopère avec **CDC45** et l’hélicase **MCM2–7** pour former le replisome **CMG**, indispensable à l’initiation et à l’élongation de la réplication de l’ADN. Psf2 favorise l’activation des origines, la progression de la fourche de réplication et l’intégrité du point de contrôle de la phase S, reliant ainsi son activité au maintien de la stabilité du génome et à une progression coordonnée du cycle cellulaire. Une expression dérégulée de **GINS2** a été associée à des programmes prolifératifs et à des phénotypes de stress réplicatif observés dans de multiples contextes de recherche sur les maladies, notamment en biologie du cancer. En tant que facteur central de la réplication, Psf2 est fréquemment étudiée dans les voies régissant les réponses aux dommages de l’ADN, la dynamique de la chromatine pendant la phase S et le stress transcriptionnel associé à la réplication.

Psf2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GINS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Psf2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GINS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GINS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Psf2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GINS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Psf2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Psf2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GINS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.