Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PSD-95 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400830
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PSD-95 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PSD-95, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PSD-95 Antibody (7E3): sc-32290
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PSD-95 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400830 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DLG4 codifica PSD-95, una proteina strutturale fondamentale della densità postsinaptica che organizza le sinapsi glutammatergiche ancorando e raggruppando i complessi recettoriali NMDA e AMPA e collegandoli alla segnalazione a valle. Attraverso i suoi domini PDZ, SH3 e GK, PSD-95 coordina il traffico sinaptico dei recettori, la plasticità dipendente dall’attività e il rimodellamento del citoscheletro, integrando vie che regolano la neurotrasmissione eccitatoria e la maturazione delle spine dendritiche. Alterazioni della funzione e della localizzazione sinaptica di DLG4/PSD-95 sono state implicate in fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a riflettere il suo ruolo nella formazione dei circuiti e nell’equilibrio eccitatorio–inibitorio. In quanto proteina hub, PSD-95 è spesso studiata nei meccanismi di apprendimento e memoria, nel ridimensionamento sinaptico (synaptic scaling) e nella proteostasi a livello delle sinapsi neuronali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PSD-95 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DLG4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DLG4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DLG4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PSD-95.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DLG4 per lo studio della segnalazione di PSD-95, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DLG4 critici per la funzione di PSD-95
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DLG4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PSD-95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PSD-95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DLG4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PSD-95 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PSD-95 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DLG4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DLG4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.