Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSCA: sc-402050-ACT

L’antigène des cellules souches prostatiques (PSCA) est une protéine de surface cellulaire ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), appartenant à la famille Ly6/uPAR, qui contribue à la différenciation épithéliale, à l’adhésion et à la signalisation intercellulaire. Dans les tissus humains, l’expression de PSCA est enrichie dans la prostate et d’autres compartiments épithéliaux, et peut moduler l’organisation des microdomaines membranaires ainsi que la signalisation associée aux récepteurs à la surface cellulaire. Une expression dérégulée de PSCA a été rapportée dans de multiples cancers d’origine épithéliale, où elle est utilisée comme marqueur moléculaire pour étudier l’état des cellules tumorales, les programmes de lignée et les interactions avec le microenvironnement. PSCA est donc pertinent pour l’étude de l’identité cellulaire, de la signalisation proximale à la membrane et du contrôle transcriptionnel en biologie du cancer.

PSCA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSCA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSCA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSCA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSCA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSCA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSCA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSCA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSCA dans les cellules tumorales présentant une expression de PSCA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.