Plasmide CRISPR/Cas9 KO pS2 (h): sc-402867

Présentation

TFF1, également connu sous le nom de pS2, code un facteur tréfoil sécrété qui contribue à l’intégrité de la barrière épithéliale et à la réparation de la muqueuse en favorisant la migration cellulaire et en régulant la restitution après une lésion. Dans les tissus humains, il est fortement exprimé dans l’épithélium gastrique et mammaire et est couramment régulé par des programmes transcriptionnels sensibles aux hormones, ce qui l’associe à la différenciation et aux phénotypes épithéliaux luminaux. pS2 participe à des voies de signalisation liées au stress et à l’inflammation qui influencent l’homéostasie épithéliale, notamment via des interactions avec les mucines et la modulation de réponses associées aux facteurs de croissance. Une expression dérégulée de TFF1 est fréquemment utilisée comme indicateur moléculaire dans des études portant sur la métaplasie gastro-intestinale et la biologie des cancers du sein positifs au récepteur des œstrogènes, où elle peut refléter des modifications de l’état épithélial et de la signalisation du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO pS2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TFF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TFF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TFF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine pS2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TFF1 pour l'étude de la signalisation de pS2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TFF1 essentiels à la fonction de pS2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TFF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le pS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le pS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TFF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le pS2 plasmide HDR (h) et le pS2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TFF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TFF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.