Plásmido CRISPR de Activación (h) PRX1: sc-405108-ACT

PRRX1 codifica la proteína homeobox relacionada emparejada PRX1, un factor de transcripción que regula las decisiones de destino de las células mesenquimales durante el desarrollo y la remodelación tisular. PRX1 influye en los programas de transición epitelio-mesénquima, la activación de fibroblastos y la organización de la matriz extracelular al coordinar redes transcripcionales implicadas en la migración, la adhesión y la diferenciación. En biología humana, la actividad alterada de PRRX1 se ha asociado con cambios en la señalización del estroma y fenotipos invasivos, lo que lo hace relevante para estudios de la dinámica del microambiente tumoral, las vías asociadas a la fibrosis y la progresión metastásica. Como regulador nuclear, PRX1 se utiliza con frecuencia como marcador y como nodo mecanístico en el trazado de linajes y el mapeo de circuitos transcripcionales en estados celulares mesenquimales y de tipo madre.

PRX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRRX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRRX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRRX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRRX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRX1 en células tumorales con expresión de PRRX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.