Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRMT1: sc-402249-ACT

PRMT1 (protéine arginine méthyltransférase 1) est la principale PRMT de type I dans les cellules humaines. Elle catalyse la diméthylation asymétrique de résidus arginine sur les histones ainsi que sur de nombreux substrats non histoniques. Par ces modifications post-traductionnelles, PRMT1 régule l’accessibilité de la chromatine, les programmes transcriptionnels, la maturation des ARN, les réponses aux dommages de l’ADN et la transduction du signal, avec des liens notables avec les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT via des interactions protéiques dépendantes de la méthylation. L’activité de PRMT1 module la progression du cycle cellulaire, les états de différenciation et l’adaptation au stress en coordonnant le contrôle épigénétique et post-transcriptionnel. Une expression dérégulée de PRMT1 ou des profils anormaux de méthylation de ses substrats sont fréquemment étudiés en cancérologie, en signalisation immunitaire et en neurobiologie comme corrélats moléculaires de modifications de l’expression génique et de la fonction du protéome.

PRMT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRMT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRMT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRMT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRMT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRMT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRMT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRMT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRMT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRMT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.