Particules Lentivirales d'Activation (h) PRDM16: sc-403464-LAC

PRDM16 code un régulateur transcriptionnel contenant un domaine PR/SET, qui coordonne la spécification des lignages et des programmes de gènes métaboliques via une activation et une répression transcriptionnelles dépendantes du contexte. Dans les lignages adipeux et mésenchymateux, PRDM16 est étroitement associé à la biogenèse mitochondriale, au métabolisme oxydatif et aux réseaux de gènes thermogéniques, via des interactions avec des cofacteurs tels que des membres de la famille PGC-1 et des complexes de modification de la chromatine. Dans le système hématopoïétique, PRDM16 contribue au maintien et à la différenciation des cellules souches/progénitrices, reflétant des rôles plus larges dans le contrôle de l’état de la chromatine et des circuits transcriptionnels du développement. Une expression dérégulée de PRDM16 ou des altérations structurales ont été associées à une différenciation aberrante et à des programmes transcriptionnels oncogéniques, ce qui soutient l’étude de PRDM16 en biologie du cancer, en métabolisme et en régulation du développement.

Les particules d'activation lentivirales PRDM16 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRDM16 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PRDM16 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRDM16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PRDM16. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRDM16 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.